高校科研检测

短链脂肪酸检测、细胞培养、代谢组学服务、肝肠胞虫检测、动物疫病检测公司
全国服务热线:
400-850-6066
新闻资讯
一站式检测技术和咨询服务
One-stop testing technology and consulting services
新闻资讯
一站式检测技术和咨询服务
One-stop testing technology and consulting services

新闻资讯

行业资讯
新闻资讯
about us
联系我们contact us
您当前位置:首页 > 新闻资讯 > 行业资讯
蛋白组学检测, 一文“吃”透蛋白质组学方法
发布日期:2020-10-15
浏览次数:12657

蛋白质组学种类

蛋白质组学分析是组学研究的一种,组学分析主要可以分为以下几种:

可能发生什么:基因组、转录组

正在发生什么:蛋白组

已经发生了什么:代谢组

蛋白组学分析手段

定性:样本中都含有哪些蛋白,这些蛋白分别是什么

定量:包括Label free/iTRAQ/TMT/SILAC/DIA等方法,研究的目的是同一蛋白在不同样本含量谁高谁低

翻译后修饰

除了定性和定量分析外,有些疾病或处理可能并没有导致蛋白本身的表达水平发生变化,而是翻译后修饰导致的,主要的研究方向有:

翻译后修饰:磷酸化、乙酰化、泛素化、甲基化

此外,还可以通过PRM/WB/ELISA靶向验证前期试验获得的数据是否可靠 (在没有抗体时可以使用PRM)。

定性和定量分析是蛋白组学最常用的分析手段。

蛋白质组学的流程

01蛋白质提取:样本处理(液氮研磨、二氧化碳研磨、超声破碎等),蛋白抽提、定量(Bradford、BCA法)、SDS-page跑胶等。

02肽段分析:蛋白酶解、肽段抽提及纯化。(修饰类的蛋白在总蛋白中的占比较低,因此组学需在肽段提取好之后增加一步富集(磷酸化、泛素化、修饰化)

03LC-MS:肽段进行一维色谱分离分级(级数可选)、质谱上级进行电离、分离、能量碰撞后获得试验碎片信息离子

04样本信息:对质谱试验所获得的碎片离子进一步分析,还原出待测样本的肽段和蛋白的具体信息。

得到原始数据后,需要对原始数据进行质控,然后通过与参考基因组进行比对,进行组装和注释,最后才可以进行一系列分析。

组学分析的展示形式

热图:Heatmap通过聚类把表达模式相同的聚集到一起,通过颜色的深浅变化,直观体现每个蛋白在不同样品中的表达情况。

维恩图

在得到差异表达的基因后,可以通过KEGG、GO等数据库进行分析,选定要研究的通路或功能相关的蛋白。

常用的蛋白组学研究相关数据库

Uniprot数据库

Ensembl数据库

KEGG数据库

GO等数据库

数据分析后的验证

在得到自己想要的差异基因后,还需要通过QPCR、WB、ELISA免疫组化的方式对分析的结果进行验证。

但是由于存在转录后调控、 蛋白质翻译水平调节和蛋白质降解等现象,转录水平的变化和蛋白水平的变化未必能完全对应,因此QPCR不是最有效的验证方式。

菲优特检测可提供蛋白、细胞等领域的服务,涵盖蛋白纯化表达、蛋白质免疫印迹(Western Blot,即 WB)、酶联免疫吸附试验细胞毒性实验细胞增殖与活性检测等,为客户提供“可靠、高效、准确”的实验数据,致力于让所有的科研工作者都做“忘忧之人”!如您有相关项目的检测需求,请直接联系工程师 在线咨询 获取检测文档及报价单或拨打服务热线 400-850-6066

创新发展,领航未来
提供一站式检测技术和咨询服务
全国服务电话:
400-850-6066