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藻类多糖对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究-高校科研检测机构
发布日期:2019-07-30
浏览次数:5732

藻类多糖对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究:

1、在人脐静脉内皮细胞HUVEC上用MTT实验筛选过氧化氢作用浓度(50um、100um、200um、400um、800um);MTT实验筛选出浒苔多糖、褐藻多糖硫酸酯、褐藻胶寡糖(50 ug/ml、100 ug/ml、200 ug/ml、400 ug/ml、800ug/ml)最适药物浓度以及过氧化氢给予刺激时间点筛选(12h、24h和36h);

2、选取其中一种药物加入人脐静脉内皮细胞HUVEC中,并设置正常组、模型组和加药组,加药2h后给与过氧化氢刺激:

①流式细胞仪检测细胞凋亡;

②Hoechst33342细胞染色观察细胞形态;

③SOD实验和ROS实验检测酶活性;

④收集细胞样品提取核酸后分别用普通PCR和荧光定量PCR实验检测Bax、Bcl-2、caspase-3的表达量;

⑤收集细胞样品制备成蛋白样品用Westorn blot实验检测pERK1/2、tERK1/2、pJNK1/2、tJNK1/2蛋白表达量。

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