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稳定细胞株构建
构建稳定细胞系的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中,用载体中所含的抗性标志进行筛选。稳定细胞株的构建周期长、难度大,每一步都很关键,尤其是细胞转染,常用物理方法(电转)、化学方法(脂质体等)、生物方法(病毒),根据不同的实验条件,选择最好的方法,来达到实验目的。
菲优特检测是您在细胞生物学领域的专业合作伙伴,为您的细胞操作实验提供专业的、可靠的解决方案。
菲优特检测生物团队提供哺乳动物稳定细胞系构建服务,与瞬时转染不同,稳定细胞系构建是指外源基因进入受体细胞并整合到细胞的染色体上,使宿主细胞可长期表达目的基因,稳定细胞株表达的蛋白/抗体稳定性更好和批次差异性更小。
构建稳定细胞系最常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素(neomycin)、潮霉素(hygromycin)和嘌呤霉素(puromycin),常用G418来代替新霉素进行选择性筛选,得到可稳定表达目的蛋白,或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。
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