藻类多糖对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究:
1、在人脐静脉内皮细胞HUVEC上用MTT实验筛选过氧化氢作用浓度(50um、100um、200um、400um、800um);MTT实验筛选出浒苔多糖、褐藻多糖硫酸酯、褐藻胶寡糖(50 ug/ml、100 ug/ml、200 ug/ml、400 ug/ml、800ug/ml)最适药物浓度以及过氧化氢给予刺激时间点筛选(12h、24h和36h);
2、选取其中一种药物加入人脐静脉内皮细胞HUVEC中,并设置正常组、模型组和加药组,加药2h后给与过氧化氢刺激:
①流式细胞仪检测细胞凋亡;
②Hoechst33342细胞染色观察细胞形态;
③SOD实验和ROS实验检测酶活性;
④收集细胞样品提取核酸后分别用普通PCR和荧光定量PCR实验检测Bax、Bcl-2、caspase-3的表达量;
⑤收集细胞样品制备成蛋白样品用Westorn blot实验检测pERK1/2、tERK1/2、pJNK1/2、tJNK1/2蛋白表达量。
本平台合作项目
分子诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析!