在生物医学研究和临床诊断领域,短链脂肪酸(SCFAs)检测愈发重要。然而,样本采集过程中的一些误区常常导致数据误差,影响检测结果的准确性。本文将聚焦粪便和血液这两种常见生物样本,详细阐述标准化采集流程与低温保存技巧,助力科研人员和相关从业者有效避免数据误差。
粪便样本:采集与保存的关键要点
标准化采集流程
采集时间:固定时间采集粪便样本意义重大。人体的生理节律会使粪便成分在一天中有所波动,早晨第一次排便时采集,可最大程度减少个体内生物学差异对检测结果的影响,为后续分析提供更稳定、可比的数据基础。
采集部位:粪便不同部位的短链脂肪酸含量并非完全一致。为确保样本能准确反映整体情况,需从粪便的多个部位进行采样。简单采集粪便表面或单一部位,可能遗漏重要信息,导致检测结果偏离真实值。
采集量:3 - 5 克的粪便样本量是经过实践验证的合适范围。过少的样本量可能因成分不具代表性或无法满足检测仪器的最低要求,造成结果偏差;而过多采集不仅浪费资源,对检测结果的准确性提升也并无帮助。
采集工具:使用无菌、无化学污染的采集工具是保证样本质量的基础。普通塑料容器可能会吸附短链脂肪酸,或者在接触过程中释放化学物质干扰检测,因此,粪便采集管或无菌勺子这类专用工具是更为可靠的选择。
低温保存技巧
立即冷冻:采集后的粪便样本犹如 “时间炸弹”,其中的短链脂肪酸在常温下极易发生降解或变化。为最大程度保留样本原始状态,应迅速将其放入 - 80℃冰箱冷冻保存。若条件有限,暂时存于 - 20℃冰箱也可,但务必尽快转移至 - 80℃环境,减少样本受温度影响的时间。
避免反复冻融:每一次冻融循环都如同对样本进行一次 “破坏”。细胞在冻融过程中会破裂,释放出的酶会与短链脂肪酸发生反应,改变其含量。因此,在样本采集后,若需要多次检测,应提前将样本按合适量分装,避免后续反复冻融。
血液样本:精确采集与妥善保存的方法
标准化采集流程
采血时间:采血时间依据检测目的而定。检测空腹状态下的短链脂肪酸,需受试者空腹 8 - 12 小时后采血,以排除食物摄入对血液中短链脂肪酸水平的干扰;研究餐后短链脂肪酸变化,则要在餐后特定时间点采血,记录不同时间的代谢动态。同时,每天相同时间采血有助于消除生物钟等因素对检测结果的潜在影响。
采血部位:静脉采血是常见方式,肘正中静脉因其位置表浅、易于操作且血管粗大,成为首选。采血过程必须严格遵循无菌操作规范,防止外界微生物污染血液样本。此外,要特别注意避免在输液同侧手臂采血,输液中的药物或其他物质可能混入血液,严重干扰短链脂肪酸的检测结果。
采血量:依据检测方法和仪器的具体要求,采血量一般控制在 2 - 5 毫升。采血量不足无法满足检测需求,过多则可能增加血液溶血风险,红细胞破裂释放的物质会干扰短链脂肪酸检测,导致结果不准确。
采血器材:无菌、无热原的采血针和采血管是保证血液样本质量的关键。对于短链脂肪酸检测,含有抗凝剂(如肝素钠或 EDTA - K2)的采血管能有效防止血液凝固,维持样本的可检测状态。同时,要严格把控采血管质量,确保其不会对短链脂肪酸产生吸附或其他干扰作用。
低温保存技巧
离心分离:采血后,血液中的细胞成分与血浆或血清成分会持续发生物质交换,影响短链脂肪酸的稳定性。因此,需尽快进行离心分离,一般在室温下以 3000 - 4000 转 / 分钟的转速离心 10 - 15 分钟,将血浆或血清分离出来,并立即转移至无菌冻存管中,阻断细胞与血浆或血清间的相互作用。
低温保存:装有血浆或血清的冻存管应迅速放入 - 80℃冰箱保存。若只是短期保存,-20℃冰箱可作为临时选择,但为保证样本长期稳定性,仍需尽快转移至 - 80℃环境。与粪便样本同理,血液样本也应极力避免反复冻融,确保短链脂肪酸在保存期间维持原有含量。
标准化的生物样本采集流程与科学的低温保存技巧,是确保短链脂肪酸检测数据准确性的基石。无论是粪便样本还是血液样本,每一个环节的精准把控都关乎检测结果的可靠性。希望本文能为从事相关工作的人员提供有益参考,推动短链脂肪酸检测技术在科研与临床应用中发挥更大价值。