CellCountingKit,CCK-8试剂含有WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐),是近年新开发的一种更新的水溶性四唑盐检测,原理与WST-1类似:在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-MethoxyPMS)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原成具有高度水溶性的橙黄色甲臜产物(Formazan)。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比,用酶联免疫分析仪测定其光吸收值可间接反映活细胞数量,在一定细胞数量范围内甲臜形成的量与细胞数成正比。可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
技术应用
药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验及生物因子的活性检测等。
技术优势
1、酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰;
2、细胞毒性非常低,因此加入WST-8显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间;
3、检测时间短;
4、非常适合批量样品检测;
5、检测试剂很稳定。
注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加 CCK-8之前更换新鲜培养基,去掉药物的影响。当然药物影响比较小的情况可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
活力计算
*细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力
活力计算:细胞活力×(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)] ×100
A(加药):具有细胞、CCK-8溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培养基和CCK-8溶液而没有细胞的孔的吸光度
A(0加药):具有细胞、CCK-8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度